Diabetologia：作用于但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肝细胞自身病原微到用到1HG心血管疾病药理学病征的成效赴援在幼儿初期就有不太好的刻画，多个肝细胞自身病原微非典HG的幼儿中的有70%在肝脏反转后10年内入院心血管疾病，而随访15年的幼儿这一人口比例降低到84%。相较之下，占药理学1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的发病机制还未取得充分的学练成研究。

愈发多的人开始应用于再行系统来度量1HG心血管疾病的成效：个微在用到多种肝细胞自身病原微时进到第1此前，用到血糖异常时进到第2此前，用到病征时进到第3此前。一些多发肝细胞自身病原微非典HG的个微，在1期和2期，成效快速，并发展为发病的1HG心血管疾病。我们此前刻画了一分组在首次监测到多种肝细胞自身病原微样本后非常来得少10年无心血管疾病的亦非慢成效者，这分组病患000人来得少，但构造非常说明。随后，我们见到肝细胞自身蛋白免疫CD8+T细胞内反应会在成效快速的病患中的基本不长期存在，但在近期发病和则有的心血管疾病病患中的很难以监测到。这不太可能表明，与成效病患相较，这些病患自身突变会的适度提高。

晚期学练成研究表明，尽管适度性T细胞内(Treg)使用量短时间，但心血管疾病病患长期存在一些功能性缺点，其中的仅限于对IL-2的反应会技能降低。此外，心血管疾病病患中的的物理现象CD4+T细胞内不太可能对适度来得具抵抗性，平庸为物理现象T细胞内的依赖性消散，自然地显现出的Treg和活微显现出的其会Treg，以及蛋白漫长的CD4+T细胞内中的IL-2反应会消散。本学练成研究的借此是刻画了CD4+适度性T细胞内(Treg)在一小群亦非快速成效者中的的构造，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

步骤：BOX学练成研究是一项以许多人辅以的纵向学练成研究，在21岁以下胃癌的病患亲属中的检查1HG心血管疾病的小心心理因素。我们此前刻画了长期快速成效者的构造，他们始终保持多重肝细胞自身病原微非典HG超过10年，但未用到心血管疾病的药理学病征，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续始终保持无心血管疾病并乐意提供大量血液样本的快速成效者纳入T和B细胞内功能性比对。在目前的学练成研究中的，8名慢成效者(SP分组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身病原微非典HG。所有的自发性都始终保持1HG心血管疾病成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身病原微对某些蛋白的非典HG反应会，然而，一名病患已经始终保持2期非常来得少6年，但未用到药理学病征，一名病患被诊断为心血管疾病，该测试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该小分长子进行时了基本上分析。转化外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内练成和T细胞内依赖性检验分析小分长子中的Treg的频带、遗传和功能性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)进行时无督导聚类比对，分析Treg遗传。

结果：与生活品质小分长子相较，来自慢成效微的知觉CD4+T细胞内的督导聚类结果显示，转录的知觉CD4+ Treg频带降低，与抑制作用其会的TNFR相关复合物(GITR)暗示降低有关。一名HbA1c上升的病患与成效快速者和匹配的印证分组相较，Treg谱有所各不相同。功能性比对表明，与生活品质小分长子相较，来自快速成效微的Treg介导的CD4+物理现象T细胞内依赖性值得注意损毁。平庸为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134暗示的依赖性降低。

由此可知1 全面性的遗传比对结果显示，CD4+Treg免疫球复合物在慢成效链表中的降低。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有小分长子的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物暗示比对出10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)应用于9个各不相同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个终端代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，来得大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端分组周围上色。每个终端中的的饼由此可知声称单个上面的暗示行政级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以结果显示整微上面暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解由此可知，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说核素为每个metacluster装入两条路线由此可知(核素> 0.05%)未确定为HD和SP分组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。紫色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 应用于CITRUS的预测模HG证实，Treg频带的降低是成效快速的徽章。分级制度旁路(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)长子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行时转化，模拟器FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分长子SP 606(紫色)中的CD25+ cd127的频带统计由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路长子集的装入两条路线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示准确度著色，对角突出的簇被辨识为SP和HD链表之间的各不相同。(j)装入两条路线由此可知结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的一般来说核素(人口比例)。(k)直方由此可知结果显示每个簇的遗传(粉红色)和Treg上面一般来说暗示与背景暗示(深蓝色);上列，文件系统Treg_3;后面一路上，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中的上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知3 与生活品质献血者相较，成效快速者知觉treg的GITR降低。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个暗示上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热由此可知(sp606不仅限于在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR暗示串联，结果显示直方由此可知(c)和统计由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有小分长子仅限于，p< 0.05(深蓝色)小分长子SP 606和匹配的HD不仅限于在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR暗示，从分级制度旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)串联，结果显示直方由此可知(e)和统计由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知4 来自快速成效的CD4+ treg细胞内控制物理现象CD4+T细胞内的技能降低。SP分组用深蓝色的两条路线和白点声称，HD分组用黑色的两条路线和白点声称，紫色的两条路线/白点声称小分长子sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按仔细观察的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠增生细胞内，培养出来3紧接著进行时流式细胞内练成监测。(a-d)与CD4+接收者者一般来说应的treg培养出来(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。应用于非典HG印证(转录的响应细胞内不含treg)计算依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 物理现象CD4+T细胞内对快速成效的T细胞内增生的依赖性来得敏感。SP分组用深蓝色的两条路线和白点声称，HD分组用黑色的两条路线和白点声称，紫色的两条路线/白点声称小分长子sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按仔细观察的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠增生细胞内，培养出来3紧接著进行时流式细胞内练成(CD25反染)和细胞内因长子比对。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同完成培养出来。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授中的的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得出的论断是，来自快速成效长子的增生知觉CD4+Treg在GITR暗示中的取得了扩展和丰富，强调了大幅度学练成研究Treg在1HG心血管疾病风险个微中的的异质性的合理性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28