Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到人体内自身抗体到注意到1改型冠心病针灸病征的成效率在老年人时期就有很好的揭示，多个人体内自身抗体感染性的老年人中所有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的老年人这一比率增大到84%。比起之下，占针灸1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的发病前提还未得到充分的研究课题。

越来越多的人开始可用分期系统对来定义1改型冠心病的成效：个体在注意到多种人体内自身抗体时转入第1下一阶段，注意到血糖反常时转入第2下一阶段，注意到病征时转入第3下一阶段。一些多发人体内自身抗体感染性的个体，在1期和2期，成效较较慢，并发展为发病的1改型冠心病。我们此前揭示了一组在首次检验到多种人体内自身抗体检验后数10年无冠心病的极较慢成效者，这组病患者数目少，但特征非常明确。随后，我们发现人体内自身特异性特异性CD8+T细胞内质子化在成效快速的病患者中所基本不不存在，但在近来发病和长期不存在的冠心病病患者中所很不易检验到。这可能表明，与成效病患者比起，这些病患者自身免疫质子化的闭环提高。

早期研究课题表明，尽管闭环性T细胞内(Treg)数量正常，但冠心病病患者不存在一些功能性缺陷，其中所仅限于对IL-2的质子化意志力降低。此外，冠心病病患者中所的畸变CD4+T细胞内可能对闭环极具抵抗性，观感为畸变T细胞内的作用于逼近，人为诱发的Treg和体外诱发的作用于Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞内中所IL-2质子化逼近。本研究课题的目的是揭示了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在群集极快速成效者中所的特征，他们的为数组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁所列确诊的病患者亲属中所检查1改型冠心病的危险性因素。我们此前揭示了长期快速成效者的特征，他们依然多重人体内自身抗体感染性最少10年，但未注意到冠心病的针灸病征，较慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续依然无冠心病并愿意提供大量体液检验的快速成效者纳入T和B细胞内功能性统计分析。在目前的研究课题中所，8名较慢成效者(SP组)，中所位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身抗体感染性。所有的举例来说都东南面1改型冠心病成效的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身抗体对某些特异性的感染性质子化，然而，一名病患者仍未东南面2期数6年，但未注意到针灸病征，一名病患者被检验为冠心病，该受试者72岁，在采集检验检验时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中所对该NADPH顺利进行了单独评估。分离出来外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内练成和T细胞内作用于飞行测试评估NADPH中所Treg的阈值、遗传和功能性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重回)顺利进行无统筹聚类统计分析，评估Treg遗传。

结果：与肥胖NADPH比起，来自较慢成效体的无意识CD4+T细胞内的统筹聚类推断，激来时的无意识CD4+ Treg阈值增大，与糖皮质激素作用于的TNFR相关亚基(GITR)理解增大有关。一名HbA1c下降的病患者与成效快速者和匹配的控制组比起，Treg谱有所各不相同。功能性统计推断，与肥胖NADPH比起，来自快速成效体的Treg介导的CD4+畸变T细胞内作用于微小损坏。观感为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134理解的作用于增大。

所示1 深入的遗传统计分析推断，CD4+Treg亚改型在较慢成效队列中所增大。由FlowSOM生成的Treg过道，聚集在来自所有NADPH的来时CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物理解鉴定出10个元簇:无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)可用9个各不相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个路由代表一个坦克部队(100个坦克部队)，非常大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由组周遭着色。每个路由中所的糕所示透露单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整体标识理解。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱该线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞内(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞内(l)。紫色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的预测模改型证实，Treg阈值的增大是成效快速的标志。分级去极化(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的近现代所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行分离出来，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)组以及NADPHSP 606(紫色)中所CD25+ cd127的阈值简介所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化子集的箱该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度著色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的各不相同。(j)箱该线所示推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比较丰度(比率)。(k)直方所示推断每个簇的遗传(蓝色)和Treg标识比较理解与背景理解(金色);上列，内核Treg_3;上头动身，内核Treg_4。背景与所有其他簇中所标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

所示3 与肥胖献血者比起，成效快速者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T细胞内元簇(无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个理解标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热所示(sp606不仅限于在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR理解串联，推断直方所示(c)和简介所示(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NADPH仅限于，p< 0.05(金色)NADPHSP 606和匹配的HD不仅限于在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR理解，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)串联，推断直方所示(e)和简介所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

所示4 来自快速成效的CD4+ treg细胞内控制畸变CD4+T细胞内的意志力降低。SP组用金色的该线和格子透露，HD组用紫色的该线和格子透露，紫色的该线/格子透露NADPHsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按辨别的比率滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞内，人才培养3天后顺利进行流式细胞内练成检验。(a-d)与CD4+需要的话者比较应的treg人才培养(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE作用于比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的作用于比率。可用感染性对照(激来时的组织起来细胞内下同treg)计算作用于比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T细胞内对快速成效的T细胞内来时化的作用于更敏感性。SP组用金色的该线和格子透露，HD组用紫色的该线和格子透露，紫色的该线/格子透露NADPHsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按辨别的比率滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞内，人才培养3天后顺利进行流式细胞内练成(CD25反染)和细胞内因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE作用于次之(b)。(c,d) CD25作用于次之(c)和CD134作用于次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自快速成效子的来时化无意识CD4+Treg在GITR理解中所得到了扩大和丰沛，重申了促使研究课题Treg在1改型冠心病风险个体中所的异质性的不足之处。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28